CODEN: MKMPA3

ISSN 0025-1097
Maked med pregled 2001; 55(Supplement 47):59-67

STANDARDIZACIJA NA TIROZIN- ADSORBIRANITE SO GLUTARALDEHID MODIFICIRANI DRVNI POLENOVI EKTRAKTI (Polinex® Trees)

D-r Wheeler imal preku 30 godini iskustvo vo istra`uvawe i razvoj vo farmacevtskata industrija, najprvo so Beecham, a potoa so SmithKline Beecham Pharmaceuticals. Od noemvri 1996 gosina toj edirektor na Allatract Ltd. (ATL), a raboti i kako konsultant vo poleto na alergii. Od skoro stanal direktor vo upravniot odbor na ATL i odgovoren za nauka i kontrola na kvalitetot. Negovata rabota na imunologijata na penicilinite e dobro poznata i ~esto citirana. Vo ponovo vreme toj e aktivno vklu~en vo razvojot na novi formi na modificirani alergeni za imunoterapija, a od 1984 godina vo razvojot na alergolo{kata dijagnostika i imunoterapija. D-r Wheeler e odgovoren za pretstavuvaweto na prviot Tpo1- inducira~ki adjuvans vo kombinacija so alergiski vakcini. ^len e na Britanskoto zdru`enie za imunologija (BSI), Kralskoto zdru`enie za medicina, Britanskata fondacija za aerobiologija (BAF), Britanskoto zdru`enie za alergologija i klini~ka imunologija (BSACI), Evropskata akademija za alergologija i klini~ka imunologija (EAACI) i drugi. D-r Wheeler e biolog so golemo iskustvo i detalni poznavawa na in vivo i in vitro imunologijata i objavil preku 150 trudovi. Doktor e na medicinski nauki, titula steknata kaj Prof. S. G. O. Johansson na Karolinska institutot vo Stokholm.

Tirozin-adsorbiranite so glutaraldehid modificiran ekstrakt za vakcina od drvni poleni (POLLINEX® Trees, Baumpolen, Polvak Baume) se upotrebuva vo tekot na mnogu godini za uspe{en tretman na I tip alergiska vkrstena reakcija na poleni od breza, evla i leska. Se pretpostavuva deka, imunoterapijata ja poka`uva svojata efikasnost preku promena na Tpo- kleto~niot profil od Tpo2 kon dominantno Tpo1 citokinski tip. Taka, modificiranite alergeni kade IgE reaktivnosta e reducirana od bezbednosni pri~ini se pogodni, bidej}i T-kleto~nata reaktivnost ne e reducirana preku modifikacijata. Ova se slu~uva bidej}i T-kleto~nite epitopi se vo vid na IgE epitopi, obi~no se prilagodlivi i zatoa se i uni{teni so modifikacijata. Produktot sodr`i inicijalna terapija od tri subkutani injekcii so ja~ina {to se zgolemuva, koja e pratena od prodol`itelna terapija od tri injekcii so najgolema ja~ina. Terapevtskite vakcini za alergija, kako {to se POLLINEX® Trees se farmacevtski produkti i zatoa se predmet na registracija, so cel da se obezbedat licencite za produktot. Ovoj produkt e napraven so inspekcija od MCA i GMP.

Barawata za registracija na “Terapevtski alergiski vakcini” (kako {to se POLLINEX® Trees) se vklu~eni vo “Bele{ki na EU za preporaki” (1) i vo EP monografijata na evropskata farmakopeja “Producta Allergernica”(2). Ovie barawa gi obvrzuvaat proizvoditelite deka podatoci mora da bidat obezbedeni, za da se dobie licenca za produktot i toa za sekoj posebno. Testovi za validnost se baraat za kontrola na kvalitetot na produktite. Ova se primenuva na razli~ni stadiumi na procesot na proizvodstvo, za da se potvrdi reproduktibilnosta na seriite kako i za ~istotata i proizvodstvoto na finalniot produkt. Specifikacii i podatoci za stabilnosta se podnesuvaat kako del od procesot na registracija.

Proceduralno site sostojki na alergiskite vakcini se sekoga{ predmet na analizi i pokraj toa {to aktivnite sostojki go privlekuvaat najgolemoto vnimanie vo tekot na poslednata dekada. Za da se obezbedi konzistencija od edna do druga serija, me|u najva`nite barawa e potrebata od standardizacija na potentnosta na produktite ili me|uproduktite.

Vo slu~aj na modificirani aklergenski ekstrakti i onie adsorbirani na slabo rastvorlivi nosa~i koi se koristat kako depo adjuvansi, razli~nite preporaki im nalagaat na proizvoditelite da gi primenat glavnite ispituvawa za Kontrola na kvalitetot na me|uproduktnite ekstrakti pred da se izvr{i modifikacija i/ili adsorbcija. Pri~inata za ova e faktot {to testovite koi ~esto se koristat naj~esto se temelat na IgE reaktivnosta na alergenite. Ovaa reaktivnost na modificirani alergeni e namerno zna~ajno reducirana, za da gi namali nesakanite efekti koi mo`e da se predizvikaat so injektirawe na produktot. I pokraj toa {to e va`no da postoi kontrola vrz me|ufazite na proizvodniot proces i da se osigura postoewe na relevantni alergeni, standardizacijata na finalnata forma na produktot vo realnosta e od najgolemo zna~ewe. Ovie standardizaciski strategii se opi{ani na kratko vo trudot.

Polenite od breza (Betula), evla (Alnus) i leska (Corylus) se nabavuvaat od izbrani nabavuva~i. Tuka se vklu~eni specifikaciite, koi me|u drugoto ja deklariraat sodr`ina na vodata, identitetot i dolnite grani~ni vrednosti na drugite poleni, drugi delovi od rastenieto i gabi~nite spori. Merewata i nivnata identifikacijata se izveduva preku izoelektri~no fokusirawe, prosledeno so boewe na proteinskite lenti so Komasi sino. Rezultatite od ovie testirawa na seriite od brezov polen, kako primer e pretstaveno na Sl. 1, za da se ilustrira dobra reproduktibilnost na seriite.

Nakratko, vodenite ekstrakti prigotveni od polen se modificirani so glutaraldehid, a potoa adsorbirani na slabo rastvorliva aminokiselina L-tirozin.

Vodeniot rastvor, podednakva me{avina po te`inski koli~estva od trite vida poleni so vkrstena reaktivnost e napraven vo puferiran solen rastvor. Za potvrduvawe na reproduktibilnosta na seriite se koristat razli~ni testovi. Na primer, vkrstenata imunoelektroforeza (CIE) se upotrebuva so koristewe na poliklonalen zaja~ki antiserum kon najva`nite alergeni od brezov polen (Bet V 1) za da se zadovolat barawata za merewe na glavniot alergen. Rezultatite od ovaa analiza se pretstaveni na Sl. 2. Isu{en so mrznewe polenski ekstrakt od breza, od samata institucija kako referenten standard se upotrebuva za komparacija i e nazna~en kako 1000 edinici za potvrda na kvalitetot (QAU/ml). Taka, ja~inata na po~etniot ekstrakt mo`e da se izrazi vo QAU/ml. Ja~inata na vodeniot rastvor mo`e da se pretvori od QAU vo mikrogrami na glavniot alergen, ako toa e potrebno. Vaka obi~no ne se izrazuvaat vrednostite, bidej}i se dobiva vpe~atok na apsolutno merewe, koe zavisi od prirodata na reagensite kako {to se monoklonalnite antitela i rekombinantnite alergeni koi se upotrebeni vo inicijalnata determinacija.

Sl.2. Merewe na glavniot brezov alergen (BetV1), vo voden rastvor preku CIE

SDS PAGE se izveduva za da se potvrdi reproducibilnosta na proteinskiot profil. Ova se pretvora vo imunoblot i se razviva so pove}e serumi od pacienti alergi~ni na drvni poleni i enzimski

ELISA inhibicijata se izveduva za da se potvrdi deka alergenskata aktivnost (reaktivnost so IgE) e reproducibilna od serija do serija. Ova e novo barawe koe se nalaga od regulatornite vlasti i taka samo limitirana koli~estva na podatoci od serijata e na raspolagawe za prezentacija. Komparacijata se pravi so referenten preparat od institucijata i se izrazuva vo QAU/ml. Paralelni linearni statisti~ki biotestovi se koristat za kompjuterska obrabotka na podatocite. Rezulatite za odreden broj na serii se prezentirani vo Tab. 1.

Sl 3. Proteinski i alergenski profili na ~etiri sukcesivni serii.

Copyright (c) 2001 by Macedonian Society of Basic, Clinical Immunology and Allergology.
All rights reserved.
WEB design: Mirko Spiroski, MD, PhD
Optimally viewed with Internet Explorer
Revised: March 5, 2001